查士丁尼一世（拉丁语：Justinianus I；希腊语：Ιουστινιανός；全名为弗拉维·伯多禄·塞巴提乌斯·查士丁尼 Flavius Petrus Sabbatius Justinianus，约483年5月11日－565年11月14日），东罗马帝国（拜占庭帝国）皇帝（527年－565年），史称查士丁尼大帝（英语:Justinianus the Great）。
在位期间多次发动对外战争，征服北非汪达尔王国、意大利东哥特王国，领土扩大。
下令纂成《查士丁尼法典》等四部法典（总称《民法大全》），为罗马法的重要典籍，对后世法律影响很大。
查士丁尼一世是古罗马时代末期最重要的一位统治者，也是一名野心家：在他统治期间拜占庭帝国经过多年的浴血奋战，终于重新控制了许多西罗马帝国从前的土地，包括意大利、西班牙、法国和北非等重要的行省，使地中海再度成为罗马的内海，同时灭亡了许多日耳曼蛮族在西罗马废墟上建立的王国，结束了他们对于罗马的和平长期以来的威胁。
在东方，他与罗马的历史旧敌-波斯的萨珊王朝（旧罗马时代称帕提亚帝国）也进行过多次战争。
他的统治期一般被看作是历史上从古典时期转化为希腊化时代的东罗马帝国的重要过渡期，也被认为是最后一个属于真正罗马人的时代。在他去世后，尽管拜占庭在马其顿王朝再度繁荣过一次，但再也没有能像他统治的时代一样成为让整个欧洲惧怕的真正意义上的帝国。